Western Blot 样本制备完整流程：从细胞 / 组织到变性样品的关键步骤与细节
在 Western Blot（WB）实验中，样本制备是决定最终结果准确性的核心环节。不少研究者在实验初期就因蛋白提取不充分、定量偏差、变性不完全等问题导致条带异常（如拖尾、冗长），最终影响实验结论。本文结合实际操作经验，详细拆解细胞与组织样本的蛋白制备流程，涵盖原理、步骤及关键注意事项，助力研究者高效获取高质量蛋白样品。
一、蛋白提取的核心原则
WB 样本制备的核心目标可概括为四点：高效提取蛋白、去除杂质干扰、保证蛋白活性（或彻底变性）、准确定量。无论处理细胞还是组织样本，均需遵循 “裂解→离心→定量→变性” 四大关键步骤，不同样本类型仅在操作细节上存在差异。
二、细胞样本的蛋白制备流程
1. 细胞裂解：破坏膜结构，保护蛋白不降解
细胞裂解是提取蛋白的基础，需通过裂解液破坏细胞膜，同时抑制蛋白酶活性，避免蛋白降解。
操作步骤：
- 弃去培养皿中的培养基，倾斜培养皿 30s 使残留液体聚集，用移液器彻底吸净；
- 沿皿壁缓慢加入预冷的无菌 PBS，轻轻晃动培养皿清洗细胞，重复 2 次，避免直冲细胞导致脱落；
- 按比例加入预冷的细胞裂解液（含蛋白酶抑制剂），推荐用量为 100μl/60mm 培养皿；
- 用细胞刮与培养皿底呈 45° 角，轻柔且均匀地刮取整个皿底（重点关注边缘角落），将细胞悬液收集至 1.5ml EP 管中。
关键细节：
- 裂解液需提前预冷，且蛋白酶抑制剂需现加现用，防止抑制剂失效；
- 细胞刮操作时力度适中，避免刮伤皿底产生塑料碎屑，混入裂解液影响后续实验。
2. 离心分离：去除细胞碎片，获取上清蛋白
离心的目的是通过高速离心分离细胞碎片与可溶性蛋白，确保上清液无杂质干扰。
操作步骤：
- 将收集的细胞裂解液放入 4℃预冷的离心机中，对称放置 EP 管（确保管内液体体积差异≤10μl，